【佳学基因检测】基因检测意向与经济收入情况的关系研究

基因检测市场调查的必要性导读

研究国家经济收入与基因检测意向的关系的目的是描述低收入或中等收入国家人群中具有孟德尔遗传模式的一系列十种遗传疾病，这些疾病可以用简单且负担得起的方法轻易识别。最近的信息显示，尽管在这些国家，遗传疾病占婴儿死亡率的10%以上，但检测、咨询和治疗遗传疾病并不是优先事项。本综述中讨论的遗传测试的选择标准是：i）一般人群中遗传疾病的频率，ii）执行的成本和容易程度，以及iii）报告文献中用于诊断这些疾病的有效方法。其目标是促进以低成本和相对容易的方式诊断遗传疾病，从而实现适当的治疗，降低死亡率，并预防高风险家庭中的遗传疾病。

本关键词：中低收入国家；基因测试；孟德尔遗传病；文献综述；先天性异常；婴儿死亡率

出生缺陷或先天异常通常遵循孟德尔遗传模式，是发达国家和发展中国家残疾的主要原因。最近的数据显示，发展中国家10-30%的婴儿死亡率是由遗传疾病造成的遗传病的诊断、咨询和治疗是许多发达国家以及中低收入国家公共卫生系统的一个重大负担，这些国家的卫生计划优先处理潜在致命和急性疾病，如感染或营养不良引起的疾病。

据世界卫生组织（WHO）专家称，由于财政机会、教育和技术发展水平太低，国家经济无法维持，在极低收入国家实施通常成本高昂的基因计划是不可能的（Kingsmore等人，2012）。因此，如今只有在中等收入、转型期和发达国家，基因筛查计划才可行。

在这篇综述中，基因检测意向与经济收入情况的关系研究组描述了一系列可用于LMIC的十种基因测试。选择需要分析的遗传病是一个关键问题。基因检测意向与经济收入情况的关系研究组的第一个标准是关注具有孟德尔遗传模式的常见疾病（单基因疾病）和可通过基因诊断的多因素（复杂、多基因和环境相互作用）疾病（表1）。其次，测试结果应能真正改善患者及其家人的生活质量（有效的可持续治疗或负责任的计划生育）。例如，乳糜泻的阳性诊断可以通过简单的饮食改变提高生活质量，而隐性疾病携带者的识别可以帮助计划生育减少受影响的出生儿童数量。孟德尔候选疾病有囊性纤维化（CF）、脊髓性肌萎缩症（SMA）、杜氏/贝克尔肌营养不良症（DMD/BMD）、脆性X综合征（FXS）、乳糜泻（CD）、成人型乳糖不耐受、遗传性血色素沉着症（HH）、家族性地中海热（FMF）、非综合征性耳聋和血栓症。虽然β-地中海贫血、苯丙酮尿症、镰状细胞病、血友病A和泰-萨克斯病等疾病是LMICs中十大孟德尔疾病（Kingsmore等人，2012），但基因检测意向与经济收入情况的关系研究组没有将它们纳入基因检测意向与经济收入情况的关系研究组的研究。这是因为它们可以通过普通的实验室方法进行诊断，而无需进行基因测试。

为了确保可持续性（要分析的样本数量将很大），基因测试应该是低成本且易于执行的。简单且价格合理的仪器，如聚合酶链反应（PCR）热循环仪、电泳系统和离心机，应足以检测选定的疾病，整个启动成本不应超过30000欧元。

病	MIM 不	基因（变异）	常见病原核苷酸变化	常见致病氨基酸酸变化	NCBI参考序列人类信使核糖核酸	参考群集ID	检测方法
囊性纤维化	219700	CFTR（F508del）	c、 1521-1523del	p、（Phe508del）	NM_ 000492.3	rs113993960	PCR、Sanger测序
脊髓性肌萎缩症	253300	SMN1	外显子缺失	-	NM_ 000344.3	-	PCR-RFLP
Duchenne/Becker肌营养不良	310200 300376	DMD	外显子缺失	-	NM_ 004006.2	-	多重PCR和琼脂糖凝胶电泳（PCR-AGE）
脆性X综合征	300624	FMR1	（CGG）n	重复扩展>200	NM_001185076.1	-	PCR-AGE
乳糜泻	212750	HLA-DQA10501*	-	-	NM_ 002122.3	-	PCR-AGE
		DQB10201*	-	-	NM_ 002123.4	-	PCR-AGE
		DRB104*	-	-	NM_ 002124.3	-	PCR-AGE
乳糖不耐受-成人型	223100	MCM6	c、 -13910C>T	-	NM_ 005915	rs4988235	PCR-RFLP
遗传性血色素沉着病	235200	HFE	c、 845G>A c、 187C>G	p、（Cys282Tyr） p、（His63Asp）	NM_ 000410.3	rs1800562 rs1799945	PCR-RFLP
家族性地中海热	249100	MEFV	c、 2080A>G c.2177T>c.2040G>c c、 2082G>A	p、（Met694Val）p.（Val726Ala）p.（Met680Ile） p、（Met694Ile）	NM_ 000243.2	rs61752717 rs28940579 RS2894080 rs28940578	PCR、Sanger测序
非综合征性耳聋	220290	GJB2	c、 35德尔格，约167德尔特 c、 235delC c.427C>T	p、（Gly12Valfs2）p.（Leu56Argfs26） p、（Leu79Cysfs*3）p.（Arg143Trp）	NM_ 004004.5	rs80338939和RS80337942 rs80338943和RS80338848	PCR、Sanger测序
血栓形成	188055	F2（G20210A）	c、 *97G>A	p、（=）	NM_ 000506.3	rs1799963	PCR-RFLP
血栓形成	188055	F5（莱顿突变）	c、 1601G>A	p、（Arg534Gln）	NM_ 000130.4	rs6025	PCR-RFLP

除三种测试外，所有测试均可通过PCR或PCR限制性片段长度多态性（RFLP）进行分析（见表2中的引物列表）。诊断囊性纤维化、家族性地中海热和非综合征性耳聋需要Sanger测序。尽管这些疾病的诊断相对昂贵，但基因检测意向与经济收入情况的关系研究组没有排除它们，因为如今测序服务的费用是可以负担的。

基因检测意向与经济收入情况的关系研究组的方法实际上是可行的，因为基因检测意向与经济收入情况的关系研究组已经启动了一个试点项目，导致在阿尔巴尼亚地拉那和俄罗斯克拉斯诺亚尔斯克建立了两个基因筛查实验室。

引物名称	序列	病
E10-F	GCAGAGTACCTGAACAGGA	囊性纤维化
E10-R	卡特卡加塔卡	囊性纤维化
ex7_ R111-F	阿加塔塔塔阿塔塔塔塔塔	脊髓性肌萎缩症
ex7_ X7-Dra-R	ccttcctttttttttgttt	脊髓性肌萎缩症
ex8_ 541C960-F	GTAATAACCAAATGCAATGGA	脊髓性肌萎缩症
ex8_ 541C1120-R	CTACACCCTTCTCAG	脊髓性肌萎缩症
外显子45-F	AAACATGGAACATCCTTGTGGGGAC	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子45-R	CATTCTATTAGATCTGTCGCCCTAC	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子48-F	TTGAATACTGGTTAATCCACATG	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子48-R	CCTGAAAAGTCTTCTTACCAC	Duchenne/Becker肌营养不良
19-F外显子	GATGGAAAGTTGAGAAAGTC	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子19-R	TTCTACACATCCCATTTCTCCA	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子17-F	GACTTTCGATGTTGAGATCTTTCCC	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子17-R	aagcttgagatgctcccttcc	Duchenne/Becker肌营养不良
51-F外显子	GaAATTGGCTTTAGTTGTTTC	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子51-R	GGAGAGTAAGTGATGGTGGAAATC	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子8-F	GGCCTCATCTCATGTTCTAATTAG	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子8-R	GTCCTTTACACTTTACCTTACCTTTTTTGAG	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子12-F	GATAGTGGCTTTATCATCCTTC	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子12-R	GaAgCaCgCaCaCaCaTaCaCt	Duchenne/Becker肌营养不良
44-F外显子	CTTGATCATGTCTTTTACCTGCA	Duchenne/Becker肌营养不良
44-R外显子	TCCATCCCTTCAGACCTGATCT	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子4-F	TTGTCGGTCTCTGCTGGTCAGTG	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子4-R	CAAGCCTCCACAACATGAGC	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子46-F	GCTAGAAAGAAATATCTGTC	Duchenne/Becker肌营养不良
外显子46-R	CTTGATTGCTCAAGCTTTTTTTCTTTTAG	Duchenne/Becker肌营养不良
c-引物-F	GCTCGCTCCGTTCGGTTTCACTCCGGT	脆性X综合征
f引物-R	AGCCCGCACTCCACACGCTCCA	脆性X综合征
DQA1*0501-F	AGCAGTTTCTAGCGTGGACCTGGGG	乳糜泻
DQA1*0501-R	GGTAGGTTGGAGGTTTAATCAGA	乳糜泻
DQB1*0201-F	CGTGCGTCTTGTGAGCAGAG	乳糜泻
DQB1*0201-R	GGCGGCAGGCAGGCCCAGCA	乳糜泻
DRB1*04-F	GGTTAACATGAGTGTCATTTAAC	乳糜泻
DRB1*04-R	GTTGTCTGCAGTAGGTC	乳糜泻
MCM6-F	GCTGGCAATACAGAATGGA	乳糖不耐受
MCM6-R	CTGCTTTGTGTGAGCGAGAGAGAT	乳糖不耐受
C282Y-F	GGGTATTCTTCCTCCAACC	遗传性血色素沉着病
C282Y-R	CTCAGGACTCCTCCACC	遗传性血色素沉着病
H63D-F	ACATGTTAAGGCCTTGGC	遗传性血色素沉着病
H63D-R	GCCACATCTGGCTTGAATT	遗传性血色素沉着病
MEFV_ ex10-F	ATTTCTTTGCAGTTATGTGATTC	家族性地中海热
MEFV_ ex10-R	加塔加加加加加	家族性地中海热
GJB2_ex2_ampl-F	TGCTTACCAGAGAGAGA	非综合征性耳聋
GJB2_ex2_ampl-R	CGACTGAGCTTGACAGCTGA	非综合征性耳聋
GJB2_ seq-F	AGTGGCCATGCACGTGGCCTA	非综合征性耳聋
GJB2_ seq-R	TGATCCTCTCGATGTCTAA	非综合征性耳聋
G>A_ F	TCTAGAAACAGTTGCCTGGC	血栓形成
G>A_ R	ATAGCACTGGGAGCATTGAGC	血栓形成
FV_ F	TGCCAGTGCTTAACAAGACCA	血栓形成
FV_ R	CTTGAGGAATGCCCCATA	血栓形成

穿越火线

CF是一种常染色体隐性疾病，是最致命的遗传性疾病（Rosenstein和Cutting，1998）。CF影响胰腺、胆道（胆汁性肝硬化）、肠腺（胎粪性肠梗阻）、汗腺和支气管腺（慢性支气管肺感染伴肺气肿）的外分泌功能，有时表现为不孕。CF的症状因疾病的严重程度而异，如果肺部受累，最终会导致死亡。在大多数情况下，根据一个或多个典型的临床特征怀疑CF，例如CF兄弟姐妹的存在或新生儿筛查试验的阳性结果，该试验检测到汗液中氯化物浓度升高（>60mM）（Rosenstein和Cutting，1998）。

高加索人中CF发生率为1:3200（Rosenstein和Cutting，1998年），其他族裔群体中可能发生率较低（非裔美国人中为1:15000，亚裔美国人中则为1:31000）。唯一已知与CF相关的基因是CF跨膜电导调节基因（CFTR），该基因有1500多个已鉴定的突变。

向LMICs建议的方法

最常见的CFTR变异是三核苷酸的缺失。1521_ 1523delCTT，其导致位于蛋白质中508位的苯丙氨酸残基的丢失，因此被称为p.（Phe508del）（最广为人知的是F508del）。该变体的存在将产生功能受损的异常CFTR蛋白。氯排泄的结果异常导致稠密、粘稠的粘液分泌，阻塞主管道，导致多系统缺陷。

该变异可通过扩增难治性突变系统（ARMS）（Ferrie等人，1992年）或通过PCR扩增外显子10，然后直接测序（Ni等人，2012年）进行检测。ARMS方法简单、快速、可靠且价格低廉，LMICs很容易提供。此外，PCR后直接测序可能是一种可行的方法；然而，LMICs将需要以额外成本利用测序服务。

诊断试验的临床应用

CF治疗的最终目标是保护肺功能。目前的治疗包括使用抗生素、黏液溶解剂、支气管溶解剂和胰酶（Rosenstein和Cutting，1998）。家庭管理方法，如气道清除、药物治疗、营养咨询和锻炼，可延长预期寿命，尽管其益处在很大程度上取决于患者对日常家庭治疗的认真程度。旨在确定人群中携带者的基因检测，特别是在发病率高的国家，对于计划生育和控制疾病传播可能很重要。

形状记忆合金

SMA和CF一样，是一种常染色体隐性疾病，是第二种致命的遗传病。SMA涉及进行性肌无力和对称性近端瘫痪，这是由于脑干核和脊髓中前角细胞的丢失和变性所致。该疾病的发病率在1:6000和1:10000之间变化，携带者的频率约为1:50（Monani和De Vivo，2014）。

有三种类型的SMA（I、II和III）取决于存活运动神经元2（SMN2）基因的拷贝数，其在人群中的范围从零到五；SMN2的数量越高，功能性SMN的数量越多，疾病的严重程度越低。有时也会出现成人发病的IV型（Monani和De Vivo，2014）。由于历史原因，这种分类一直存在。如今，科学家们认为，这些类别之间的界限不太明显，患者表现出从子宫内发病（真正严重）到中老年发病（非常轻微）的一系列SMA严重性。尽管临床严重程度差异很大，但所有SMA患者都有典型的肌无力，其影响近端肌肉多于远端肌肉，下肢多于上肢，肋间和轴向肌肉群多于膈肌（Monani和De Vivo，2014）。早些时候，临床医生使用肌电图和活检特征进行诊断，如肌肉失神经；然而，SMN1的分子检测现在允许高效和特异的诊断。为了延缓疾病的发展和延长患者的生命，需要基本的营养和呼吸护理以及物理治疗。一些新药正在测试中，其他药物，如丙戊酸，已经为人所知。瘫痪可以停止，但不能逆转

向LMICs建议的方法

该疾病是由SMN变异引起的（Monani和De Vivo，2014），存在于两个几乎相同的拷贝中，SMN1位于染色体5的端粒区，SMN2位于同一染色体的着丝粒区附近。遗传变异降低了SMN的水平，导致脊髓中的阿尔法运动神经元退化（Monani和De Vivo，2014）。正常个体（野生型）可同时拥有SMN1和SMN2，或仅拥有SMN1，占SMN库的90%。总的来说，95%的患者存在SMN1到SMN2的缺失或转换引起的变异，导致SMN1的外显子7单独或与外显子8组合出现纯合缺失。van der Steege等人（1995年）报告了一种简单、方便和快速的方法，其中PCR产物经限制性内切酶消化并在凝胶上显示，显示了SMA患者的特定模式。SMN外显子8和复制基因的PCR产物可以很容易区分，因为后者包含限制性内切酶DdeI的识别位点（SMN外隐子8中缺失）。外显子7中任何已知酶的限制性位点均不存在差异。因此，为了检测复制基因外显子7的PCR产物，van der Steege等人（1995年）开发了一种与变异位点相邻的寡核苷酸，该寡核苷酸携带错配，以创建DraI的限制性位点。

诊断试验的临床应用

由于SMA是最常见的致命遗传病之一，直接携带者检测对许多家庭都是有益的（Monani和De Vivo，2014）。建议对SMA进行基因诊断测试，因为它不需要侵入性肌肉活检。在找到有效的治疗方法之前，还建议进行产前诊断以预防新病例。

DMD

DMD是肌肉萎缩症最常见的临床形式。这是一种X连锁形式，由肌营养不良蛋白基因变异引起，其特征是进行性肌肉萎缩

肌肉中缺乏肌营养不良蛋白导致的虚弱和消瘦（Uwineza等人，2014；van Ruiten等人，2014）。DMD患者骨骼肌损伤增加，完全瘫痪和死亡，通常是由于呼吸和/或心力衰竭。

大约每3500名新生儿中就有1人感染此病。DMD的诊断基于对临床特征的仔细分析，并通过肌肉活检和/或基因检测等进一步研究证实（De Palma等人，2014）。血液中肌酸激酶水平升高可反映肌肉损伤（van Ruiten等人，2014）。然而，诊断DMD仍然太迟。

BMD是由同一基因变异引起的DMD的较不严重变异。

向LMICs建议的方法

DMD/BMD是由肌营养不良蛋白基因的移帧缺失、重复或无义变异引起的；一个或多个外显子的缺失占DMD和BMD病例的55-65%（Forrest等人，1988年；Den Dunnen等人，1989年）。扩增最常见缺失外显子的多重PCR能够通过琼脂糖凝胶电泳检测DMD/BMD患者中约98%的缺失（张伯伦等人，1988；张伯伦等，1990；Beggs等，1991）。

诊断试验的临床应用

糖皮质激素治疗可以在短期内减缓疾病进展并改善运动功能。需要积极干预以应对呼吸或心力衰竭的迹象。在过去20年中，科学家开发了新的治疗方法，显著提高了DMD患者的生活质量和预期寿命（van Ruiten等人，2014年）。DMD的早期诊断能够及时获得遗传咨询、标准护理和临床试验。

FXS

FXS是全世界智力残疾和自闭症谱系障碍最常见的遗传原因。脆性X智力低下1（FMR1）基因中CGG重复序列的扩增导致FXS（Tassone等人，2008）。FMR1的缺失导致许多突触蛋白表达的抑制减少。FXS在男性中的患病率高于女性（3600-4000人中约有1人，4000-6000人中约1人）（Cea Del Rio和Huntsman，2014）。与FXS相关的身体特征是突出的耳朵、长脸、高拱形腭、巨齿症和手指关节过度伸展。约25%的女性和85%的男性有认知障碍（IQ<70）。他们的特征还包括多动、注意力不足、眼神接触不良、害羞、自言自语、焦虑、情绪不稳定、对感官刺激过度敏感和自闭症（Cea Del Rio和Huntsman，2014）。FXS患者通常会遇到一系列医学问题，如中耳炎、癫痫和胃肠道问题。

携带者筛查通常在生殖保健的背景下进行。可根据结果向父母通报生殖选择和计划生育。在2006年美国医学遗传学学会的报告中，不建议将新生儿FXS筛查（NBS）纳入需要NBS的疾病范围，部分原因是早期检测没有医学优势。然而，最近的报告显示

大型筛查研究证明了广泛检测的技术可行性、遗传咨询的益处以及治疗的进步，可能会改变这种情况。在FXS的情况下，识别携带者不仅可以提供有关FXS儿童风险的咨询，还可以告知个人健康风险（Tassone，2014）。

向LMICs建议的方法

Tassone等人（2008年）报告了一种基于PCR的FXS检测筛选方法。使用标准引物产生PCR产物的样品，对于雌性为单带（明显纯合性），或者对于雄性为无带，使用c引物和CCG嵌合引物进行第二轮PCR筛选，该引物靶向重复扩增道的CGG链，而不是f引物。

诊断试验的临床应用

在过去几年中，基因检测意向与经济收入情况的关系研究组进入了一个靶向治疗的新时代，对米诺环素、舍曲林、mGluR5拮抗剂和γ-氨基丁酸a和B受体激动剂等药物进行了大量临床试验，显示了对FXS患者（包括幼儿）的益处和疗效。新的靶向治疗将继续发展，通过新生儿诊断和家族级联检测确定的临床参与的多个家庭成员也将受益于早期治疗和长期随访（Tassone，2014）。对于儿科医生和其他临床医生来说，熟悉与FXS相关的医学问题是至关重要的，这样受影响的患者就可以得到正确的诊断和治疗。改善护理可能会提高这些患者及其家人的生活质量。

镉敏感性

CD是最常见的食物不耐受，目前是一个主要的医疗保健问题。CD是一种由小麦、大麦和黑麦麸质引发的慢性小肠病（Green and Cellier，2007；Tack等人，2010）。CD涉及遗传易感个体的自身免疫反应，导致小肠粘膜受损、营养吸收不良和营养不良相关问题（Tack等人，2010）。CD的临床表现因年龄组而异。婴幼儿通常表现为腹泻、腹胀和发育不良，但呕吐、易怒、厌食和便秘也很常见。青少年和年龄较大的儿童经常表现出肠外症状，如贫血、身材矮小和神经症状（Green和Cellier，2007年）。最近的估计表明，约1%的世界人口患有这种疾病。这种疾病不仅存在于欧洲和欧洲血统的人居住的国家，也存在于亚洲、中东、北非和南美。根据十二指肠活检、血清学和对无麸质饮食的反应诊断CD。然而，由于临床、血清学和组织学检查结果不一致，约10%的病例难以诊断（Green和Cellier，2007）。

向LMICs建议的方法

尽管已经研究了导致CD发病的环境因素

经鉴定，遗传风险因素的作用也是众所周知的。在涉及最多的基因中，最著名的是HLA-DQA1和HLA-DQB1（MHCII家族中在人群中高度多态的基因）。约90%的CD患者携带DQ2。5（HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*02）单倍型和几乎所有其他单倍型携带DQ8（DQA1*03）

/DQB1*0302）单倍型。与此同时，30%和10%的普通人口拥有DQ2。5和DQ8单倍型。

Sacchetti等人（1997年）报告了一种快速、准确、高分辨率和经济高效的基于PCR的方法，用于分析HLA-DQA10501、DQB10201和DRB104等位基因的基因型。该方法的优点是检测速度快，不需要放射性物质。在样本DNA采集的2小时内，研究人员可以在同一凝胶上观察到最常与CD相关的三个等位基因。基因检测意向与经济收入情况的关系研究组认为，该方法可以代表CD诊断库中的另一个工具，因为它适用于流行病学研究、家庭筛查以及组织学和免疫学模式不明确的病例诊断。

诊断试验的临床应用

在出现症状的情况下进行HLA基因分型等基因检测，可以绕过基于活检和组织病理学检查的更具侵入性的诊断方法。存在诸如估计组织转谷氨酰胺酶水平和检测结缔组织肌内膜自身抗体的血清学测试。然而，这些测试中的阴性结果并不保证受试者将来不会发展成这种疾病（Tack等人，2010）。CD的唯一有效治疗方法是遵循无麸质饮食，这对绝大多数患者来说是足够的。临床改善通常在几周内明显（Tack等人，2010）。虽然CD的诊断率正在上升，但在许多受影响的人中，CD仍然没有被诊断出来。筛查的适应症包括腹胀、肠易激综合征、甲状腺疾病、慢性不明原因腹泻、慢性疲劳和便秘。许多CD患者因各种常见症状寻求医疗保健。因此，频繁使用筛查方法将有助于识别新病例（Green和Cellier，2007年）和早期诊断，从而减少疾病并发症。

成人型乳糖不耐受

乳糖不耐受是一种具有广泛症状的胃肠道疾病。由于缺乏乳糖酶根皮苷水解酶（LPH），也称为乳糖酶缺乏症。75%的世界人口对乳糖不耐受；然而，存在明显的地理变异性，南北频率梯度从北欧人口的5%到一些非洲和亚洲人口的80-90%（Sahi，1994）。在MCM6（2q21-22）基因中发现了C/T多态性，该基因位于编码LPH（LCT）的基因上游13910bp，与成人乳糖不耐受（也称为乳糖酶非持久性）相关。与较低基因转录相关的纯合C变异与乳糖不耐受表型相关（Enattah等人，2002年）。根据疾病原因，乳糖酶缺乏分为原发性、继发性或先天性（Heyman，2006）。在南美和非洲，这种疾病的发生率超过50%，而在某些亚洲国家，其发生率接近100%。总的来说，世界上66%的成年人是乳糖酶非持久性的。次级乳糖酶

缺乏症与小肠损伤或其他环境因素有关。先天性乳糖酶缺乏症（CLD）是一种非常罕见和严重的常染色体隐性胃肠道疾病，由LCT突变引起。在受影响的芬兰家族中发现了五种常见突变，其中一种-p.（Tyr1390*）是创始人突变，存在于90%的疾病等位基因中。最近在芬兰人口之外发现了该基因的突变（Torniainen等人，2009年）。CLD的发病率为1:60000，分布于全球，但在芬兰更为常见。

对于新生儿来说，摄入乳糖会导致严重的症状，无法进行母乳喂养。严重的渗透性腹泻，随后出现脱水、酸中毒和体重减轻，通常在患者出生后的第一天就受到折磨。尽管有这些症状，CLD婴儿仍然精力充沛、饥饿。未经治疗的疾病会导致脱水，通常需要住院治疗。当患有各种形式乳糖酶缺乏症的患者从饮食中排除奶制品时，症状通常会在短时间内消失。钙必须通过非乳制品的替代膳食来源提供，或作为避免食用牛奶的个人的膳食补充剂。

虽然很少危及生命，但乳糖不耐症的症状可导致严重不适，生活质量、休闲和体育活动中断，以及学校/工作场所出勤率下降。因此，这种疾病给个人、家庭和社会带来了损失。

向LMICs建议的方法

原发性（晚发性）乳糖酶缺乏症是乳糖不耐受的最常见原因，并在儿童的各个年龄段发展。其发生是由于MCM6的非编码部分中的某些常见变化，该部分调节LCT的表达。

Mulcare等人（2004年）报告了一种基于PCR-RFLP的乳糖缺乏检测方法，包括在MCM6_。如果存在C等位基因，则限制位点不存在，因此，消化产生201 bp的产物。

诊断试验的临床应用

直接基于DNA的CLD诊断和携带者鉴定有助于快速干预，从饮食中消除奶制品，并为这种严重疾病提供遗传咨询。此外，检测c.-13910C>T多态性的基因检测有助于在症状与其他乳糖酶缺乏症重叠的患者中鉴别诊断晚发性先天性乳糖不耐受，如胃肠炎（继发性缺乏）、慢性酒精中毒、CD、，营养失调、药物治疗和外科手术。

嗯

HH是一种由血色素沉着症（HFE）基因突变引起的常染色体隐性疾病。HFE编码一种非典型MHC I类分子，调节铁吸收，扰动导致体内铁积累。过量铁沉积在不同器官中会导致严重疾病，如肝衰竭和肝硬化、肝细胞癌、动脉粥样硬化、关节炎、疲劳、各种内分泌疾病（包括糖尿病）、心脏问题（心律失常、心肌病和心肌功能丧失）、皮肤黑色素沉着过度、心脏病、心脏病、，和免疫缺陷（Vujić，2014）。

在北欧血统的人中，HH的估计载频为10%。在患有HH的欧洲患者中，约87%是导致蛋白质一级序列中p（Cys282Tyr）和p（His63Asp）改变的突变纯合子或复合杂合子（Feder等人，1996）。

最常损害生活质量的HH症状是涉及大小关节的对称性多关节炎，影响30%至60%的HH患者。硬化、骨刺、关节间隙狭窄和软骨钙质沉着症在X光片中很明显。最有用的HH筛查试验是测定血清转铁蛋白饱和度。血清铁蛋白是一种高度敏感的HH检测标志物，但特异性较低。因此，通常建议将铁蛋白和转铁蛋白饱和度检测相结合，用于筛查高危人群，包括家庭筛查，以及针对症状的诊断检测。

如果不治疗，HH会危及生命。通过静脉切开术将血清铁蛋白浓度维持在或低于50ng/mL是简单有效的。患者的生活质量可以通过避免药用铁、矿物质补充剂、过量维生素C和生海鲜来改善。

如果在HH患者早期进行预防性静脉切开术，可以避免器官损伤和铁负荷。这些发现强调了在临床症状出现之前及早发现的重要性。

向LMICs建议的方法

Oliveira等人（2006年）报告了一种基于PCR-RFLP的HH检测方法。p.（Cys282Tyr）变体为RsaI创建了一个新的切割位点。经消化的PCR产物在野生型等位基因（Cys/Cys）中产生两个145和296bp的片段，在突变等位基因中产生三个片段（29116和296BP），而在杂合子（Cys/Tyr）患者中产生四个片段（29、116、145和296 bp）。p.（His63Asp）变异消除了BclI识别位点，产生207bp的产物，而野生型序列（His/His）产生两个69和138 bp的片段，当变异处于杂合状态时产生三个69、138和207的片段。

诊断试验的临床应用

HH符合通过基因检测进行人群筛查的公认标准：1）在目标人群中相对常见，2）无症状期长，允许在发生不可逆器官损伤之前进行筛查和治疗，3）治疗费用低廉且容易获得，4）早期干预可以预防严重和危及生命的后遗症，使人口测试成为预防疾病和死亡的成本效益高的计划。如果在疾病早期进行预防性静脉切开术，血色素沉着症患者的铁负荷和器官损伤可以预防，这表明在临床症状出现之前早期检测的重要性。总之，通过生化分析（例如，血清铁估算）或基因型分析对p.（Cys282Tyr）纯合性（如高加索男性）或p.（Cys2 82Tyr）和p.（His63Asp）复合杂合性导致的高发病风险人群进行有针对性的筛查是合理的、成本效益高的，不会造成心理伤害、歧视或耻辱。为了最大限度地提高成本效益并最大限度地减少模糊遗传信息的积累，建议仅针对p.（Cys282Tyr）变体的存在进行基因型筛选。

FMF

FMF是一种常染色体隐性遗传疾病。FMF的症状各不相同，从反复发作的发热、腹膜炎和胸膜炎到滑膜炎症，伴有疼痛和频繁的淀粉样变并伴有肾功能衰竭。FMF在地中海东南部地区更为频繁；在非德系犹太人、亚美尼亚人、土耳其人和阿拉伯人中，平均频率约为1-5/1000；它在利比亚犹太人中的流行率高达1:248，在北非犹太人和伊拉克犹太人中的携带率为1:3-1:7（Almeida de Jesus和Goldbach Mansky，2013）。唯一已知的导致FMF的遗传变异发生在MEFV染色体16p13位点。FMF的典型特征是频繁发热，与急性内脏疼痛相关，以及持续数天的大关节炎。耀斑周期性地复发，从每周一次到每年一次，其间无症状间隔。

向LMICs建议的方法

在MEFV的第10外显子中发现了四种常见变异，在第2、3、5、9和10外显子中发现了不太常见的突变。Tchernitchko等人（2005年）报告了外显子10的直接测序作为诊断方法。

诊断试验的临床应用

FMF的诊断包括检测MEFV的变异。FMF的治疗包括使用秋水仙碱作为FMF患者炎症发作和反应性淀粉样变的标准预防措施，这远远早于了解FMF的遗传基础。现在建议对p（Met694Val）纯合子或p（Met684Val）、另一种致病等位基因复合杂合子的患者进行这种治疗（Shohat和Halpern，2011）。对于秋水仙碱反应差的患者，已经测试了其他疗法，如硫唑嘌呤、沙利度胺和干扰素。目前，anakinra、canakinumab和rilonacept阻断IL-1已成为治疗秋水仙碱反应不良患者的首选药物，尽管这些药物尚未被批准用于治疗FMF（Gül，2014）。MEFV的分子遗传学检测可提供给患者的家庭成员，特别是在涉及p（Met694Val）等位基因（Shohat和Halpern，2011）作为肾脏疾病的情况下

淀粉样变可以通过及时治疗来预防。

非综合征性耳聋

耳聋是发达国家最常见的感觉缺陷，在欧洲影响到每500名新生儿中就有1名（希勒和史密斯，2012年），尼日利亚每1000名新生儿中约有7名耳聋，南非每1000名婴儿中约有5.5名耳聋（Bosch等人，2014年）。医生可以通过其相关的综合征特征识别某些形式的遗传性耳聋，但通常情况下，听力衰竭是唯一的发现，被称为非综合征性耳聋（Duman和Tekin，2012）。非综合征性听力损失（NSHL）占遗传性耳聋的70%（希勒和史密斯，2012）。

单基因NSHL的遗传模式为常染色体隐性遗传（ARNSHL），约80%的病例为常染色体显性遗传，约20%为X连锁遗传，不到1%为线粒体遗传。到目前为止，研究人员已经在65个导致非综合征性耳聋的基因中发现了超过700个不同的突变。

缝隙连接大量存在于耳蜗中，使小分子能够在相互连接的细胞之间扩散。连接蛋白是形成六聚半通道或连接子的跨膜蛋白。耳蜗支持细胞优先表达连接蛋白的Cx26和Cx30亚型。它们的作用是维持内耳的K+稳态，并在上皮和结缔组织间隙连接中表达。编码Cx26的GJB2和编码Cx30的GJB6在DFNB1基因座上彼此非常接近（Duman和Tekin，2012）。

向LMICs建议的方法

据报道，GJB2突变使该基因成为许多人群听力损失的最常见原因（Duman和Tekin，2012）。然而，除加纳外，撒哈拉以南非洲地区没有出现这种情况（Bosch等人，2014年）。

Wu等人（2003年）报道了GJB2外显子2的直接测序分析。

诊断试验的临床应用

分子遗传学检测可明确诊断遗传性听力损失，并有助于决定进一步的患者管理（希勒和史密斯，2012）。识别耳聋的遗传标记可能有助于早期发现并帮助选择治疗方法。

血栓形成

血栓形成嗜血症是一个主要的医学问题，每年影响0.1%的人口。最常见的临床表现是肺栓塞和静脉血栓形成。凝血因子V（F5）基因中的两个单一变体，即p（Arg534Gln），最著名的因子V莱顿（FVL）变体和凝血因子II（F2），即c.*97G>A，也被称为凝血酶原G20210A变体，在普通人群中很常见，构成血栓形成的主要遗传风险因素（Dahlbäck，2008）。与普通人群相比，FVL杂合子个体的静脉血栓形成风险大约高出三到五倍，而该突变纯合子个体静脉血栓形成的风险高出80倍。突变蛋白失活，比正常因子V慢，并且具有更长的半衰期。结果是凝血酶生成增加和轻度高凝状态。FVL突变作为常染色体显性性状遗传，是高加索人群中最常见的突变（约5%），发生在美国和欧洲的3-7%个体中，但在亚洲、非洲和澳大利亚土著人群中极为罕见。FVL可以通过功能性APC抗性测试或基于DNA的检测进行鉴定，这些检测对FVL突变具有约100%的敏感性和特异性（Dahlbäck，2008）。

因子II相关的血栓形成倾向是血栓形成的第二常见遗传意外事件。凝血酶原G20210A是基因编码因子II的3’-UTR中一种常见单点变体的历史名称，它增加凝血酶原酶的合成和浓度。凝血酶原相关血栓症以常染色体显性方式遗传；该变体的杂合性（突变发生在多聚腺苷酸化位点附近，增加mRNA积累和蛋白质合成）导致血栓形成风险增加。在没有其他后天或环境倾向的情况下，杂合子的相对风险约为2至4倍（Martinelli等人，2000年）。最近的研究没有包括足够多的“A”等位基因纯合个体来评估对复发风险的影响。

与FVL突变相似，凝血酶原基因G20210A变异在高加索人中更常见。杂合子的出现频率在普通人群中约为2%，在南欧人群中为3.0%，在北欧人群中为1.7%。这在亚裔和非洲人后裔中非常罕见（Safavi Abbasi等人，2008年）。然而，不同的研究表明，凝血酶原G20210A与FVL突变的关联不仅增加了静脉血栓发作的风险，而且增加了复发的风险。事实上，FVL和凝血酶原G20210A杂合子（约1/1000美国人）的复发血栓形成风险比单独FVL携带者高2.6倍（Safavi Abbasi等人，2008年），比没有突变的个体高20倍，这表明风险呈倍增趋势（Segal等人，2009年）。这种疾病也可以通过基于DNA的分析进行鉴定（Martinelli等人，2000年）。

向LMICs建议的方法

FVL血栓形成性是由于F5中1691位核苷酸的特异性G-to-A置换，导致因子Va分子中三个APC切割位点之一的氨基酸置换（Arg506Gln）（Safavi Abbasi等人，2008）。

F5中第1691bp处的G到A替换导致限制性内切酶MnlI的识别位点丢失。Voelkerding等人（1996年）利用这一点开发了基于PCR-RFLP的检测突变的测试。

Poort等人（1996年）报告了使用带有Hindlll位点的诱变引物，使用PCR和HindIII消化检测凝血酶原基因3’-UTR中的凝血酶前G20210A突变。来自频率较低的等位基因（A）的扩增产物在酶消化后产生两个片段（322和23bp）。更常见的等位基因（G）缺乏限制性位点，因此在消化时仅产生345bp片段。

诊断试验的临床应用

血栓症是一种严重的死亡率和发病率来源，静脉血栓栓塞继续给临床医生带来挑战。建议携带FVL变体或凝血酶原G20210A变体的个体接受口服抗凝治疗（Safavi Abbasi et al.，2008）。在大多数情况下，静脉血栓首先用维生素K拮抗剂和肝素的混合物治疗（Dahlbäck，2008）。由于这些突变的发生率似乎在40岁以下死亡的人群中显著增加，因此对这些患者的亲属进行检测可能有助于检测将受益于预防性抗凝治疗的高危人群（Ranguelov等人，2002年）。

结论

发展中国家迫切需要遗传咨询（Lee和Thong，2013）。2010年，世界卫生组织将出生缺陷护理和预防服务列为优先事项，特别是在低出生缺陷综合征中。由于各种原因，这些国家的遗传服务很难发展。面临的挑战包括资源有限、公众意识低下、宗教和社会问题等伦理困境以及遗传健康专业人员，特别是遗传咨询师的短缺（Lee和Thong，2013）。

在这项研究中，基因检测意向与经济收入情况的关系研究组确定了十种高发病率的疾病，诊断为LMICs可以改善患者的生活质量，或实现负责任的计划生育。十种疾病中有六种具有常染色体隐性传播（CF、SMA、成人型乳糖不耐受、HH、非综合征性耳聋和FMF），两种具有X连锁传播（DMD和FXS），一种具有常基因显性传播（血栓形成性），另一种具有常染色体隐性/多因素传播（CD）。对于其中一些疾病，基因分析只关注文献中引用的外显子或突变，而不是整个基因。这是有限的，因为必须通过正确的诊断、安全和高质量的患者护理以及负责任的生育来解决遗传疾病。

许多研究表明，实施遗传服务对于LMIC中先天性疾病的护理和预防非常重要，但很少受到关注。在积极的流行病学转变中，一些中等收入国家和少数低收入国家，如阿根廷、巴林、巴西、智利、中国、古巴、埃及、印度、伊朗、马来西亚、墨西哥、阿曼、菲律宾、沙特阿拉伯、泰国、阿联酋和乌拉圭，已经开始并正在发展医疗遗传服务，以护理和预防先天性疾病。新生儿可预防儿童疾病筛查和人群筛查，以检测常见隐性疾病携带者，与遗传咨询和医疗相结合，具有成本效益，对许多国家的患者及其家人有益。

LMICs社区遗传学面临的主要挑战是人口教育、建立由能够提供适当咨询和跟进的遗传专业人员组成的基础设施，以及适当考虑核心伦理原则。这些要求目前在大多数发展中国家无法满足，因此基因检测不足以改变患者的生活。

在这里，基因检测意向与经济收入情况的关系研究组提出了一个模型，用于在LMIC中实现负担得起且容易的遗传疾病诊断。基因检测意向与经济收入情况的关系研究组认为，必须建立诊断遗传疾病的实验室，并通过培训实验室技术人员和当地医生，将专门知识直接转让给LMICs。这些专业实验室应建立在研究或医疗中心（大学和医院）内部或附近，这有助于在研究人员或医生与诊断实验室之间建立正确的合作关系。实验室技术人员应学习所需的技术，以进行简单、廉价的测试，分析此处所述的遗传疾病，并学习当地医生识别症状和记录患者家族史。

基因检测意向与经济收入情况的关系研究组最近在阿尔巴尼亚和俄罗斯建立了两个试点实验室。阿尔巴尼亚实验室去年7月开始了自己的活动，测试了几名患者的血栓形成、乳糜泻和乳糖不耐症。俄罗斯实验室成立于2016年3月，目前仍在进行人员培训。

基因检测意向与经济收入情况的关系研究组坚信，该模型可以由其他LMIC实施，并满足这些国家对基于遗传筛查的先天性疾病诊断的迫切需求。此外，这项投资可以为生物医学学生、科学家和医学专业人员创造有吸引力的就业和研究机会，并说服他们返回原籍国。

(责任编辑：佳学基因)

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