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【佳学基因】基因检测技术大全:双脱氧DNA测序技术

【佳学基因】基因检测技术大全:双脱氧DNA测序技术。 基因测序技术是当今最热门的分子诊断技术之一,它通过获取尽可能多的核酸序列,并对其所能带来的价值进行分析,基因测序技术一定发展到第四代。第一代测序技术是传统的DNA一代测序技术以Sanger双脱氧末端终止法为代表。该方法通过凝胶电泳区分长度不同的DNA片段,从而判断碱基排列情况。一代测序技术在遗传病致病

佳学基因】基因检测技术大全:双脱氧DNA测序技术


基因测序技术是当今最热门的分子诊断技术之一,它通过获取尽可能多的核酸序列,并对其所能带来的价值进行分析,基因测序技术一定发展到第四代。

第一代测序技术是传统的DNA一代测序技术以Sanger双脱氧末端终止法为代表。该方法通过凝胶电泳区分长度不同的DNA片段,从而判断碱基排列情况。一代测序技术在遗传病致病基因的克隆、遗传病的基因诊断、人类基因组计划的实施等方面起到了重要作用,目前仍是判定测序结果准确性的金标准。由于存在较长时间的电泳环节,测序效率低,数据产率低。以此为基础的测序仪器被个别公司垄断。

以Sanger为基础开发的第一代测序仪器的核心技术有三个:一是酶法合成DNA,二是标记末端核苷酸的终止;三是用凝胶电泳的方法将新合成的核苷酸链按合成终止时的长度分开;四、是实现分离后检测DNA片段。基于毛细管电泳的全自动桑格法测序仪由于读取长度、通量、准确度等优点,目前仍有一定的市场,多用于序列验证(不同方法)、法医鉴定(更准确)等。这种仪器市场的长远发展,要看二代测序仪的技术优势能否全面颠覆,以及仪器制造商是否盈利。

这一代测序原理很简单清楚,通过链式终止法来读取序列信息(想知道怎么测的自己百度sanger测序)。我估计这个东西的成本不高,我们在实验室送公司的外包测序一次反应10块钱测800bp,一次刨除人力成本我不知道还剩几块钱。并且这款很好,市场上各种阿猫阿狗公司都会来推销他们的排序服务。

这种分析技术是分子生物学的重要基础技术。ABI公司的序列仪为例,用4种荧光染料对端子和引物进行标记,并用Sanger测序反应得到不同的荧光标记。每个样本的4个测序反应产物都可以在同一泳道内电泳,从而减少不同测序泳道间迁移率的差异对准确度的影响。同时,采用同步扫描技术对各荧光标记片段进行电泳分离,激发荧光经光栅分光,识别不同碱基信息的不同颜色荧光,并在CCD照相机上同步成像。计算机可以在电泳过程中同步检测仪器的运行状态,并能以电泳、荧光吸收峰图、碱基的排列次序等方式输出。这是一种测序技术的基本原理。


 

 

(责任编辑:佳学基因)
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